葛根素(Puerarin,Pue)具有扩张血管、降压、抗心肌缺血等作用。前人对葛根素扩血管机理的研究存在着争议，这可能与实验条件及种属的不同有关。目的：通过对葛根素血管舒张作用机理的研究，探讨不同血管段血管活性的差异，以NO合成酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NAME)为基础，研究葛根素对不同主动脉舒张作用与一氧化氮的关系。探讨其舒血管作用机理。

1信息和方法。

1.1试验材料。

1.1.1实验动物：SD大鼠36只，体重250~300g，雌雄兼用，由青龙山动物中心提供。

1.1.2药物：重酒石酸去甲肾上腺素(NoradrenalineBitartrate)NA)购自天津金耀氨基酸有限公司，批号：0803192；苯肾上腺素(Phe)，从Fluka购买L-硝基精氨酸(L-NAME)批号：1115878.40705093；氯化乙酰胆碱(Ach)从AlfaAesar公司购得，批号：10132497；由南京师范大学袁生教授实验室提供；溶于50%丙二醇用于实验。

1.1.3试剂：K-H液：NaCl118.0mM,KCl4.7mM,NaHCO325.0mM,KH2PO41.2mM,MgSO41.2mM,CaCl22.5mM,glucose11.0mM。分析纯属国产通用产品。

1.1.4仪器：从南京医科大学购买MD2000生物信号采集系统。

.2.试验方法。

1.2.1不同种属动物胸主动脉环制备：20%乌拉坦(给药计量1g/kg)，给药量0.6ml/100g。将正常人胸主动脉置入低温K-H溶液中，置入100%O2饱和，除去血管周围结缔组织，制成3~4毫米血管环，在盛有95%CO2混合气体的K-H液的5ml容器中，将其制成3~4毫米的血管环；下端用铁丝钩固定，上端与拉力传感器连接，MD2000生物信号采集系统记录张力电平。持续通气进入浴缸，保持(37±0.5)恒温，给予不同的前期负荷，15min换一次缓冲液，平衡60min,NA(浴槽浓度10-6mol.L-1)预收缩2次，用K-H液洗脱到基线后进行以下试验。采用机械方法去除内皮组织。对血管内皮活性的检测：应用Phe(浴槽终值10-6mol.L-1)对动脉环进行收缩，使之达到平台，在血液循环中加入Ach(浴槽终度10-5mol.L-1)血管环舒张到平台，以检查内皮的完整性，舒张活率大于70%的内皮活性是完全的，而舒张活性大于20%的是内皮活性。

1.2.2葛根素对苯肾上腺素诱发的收缩作用：随机选取胸腔内主动脉环，全内皮组分为：全内皮组、溶剂组、正常对照组、使用Phe(浴槽终浓度10-6mol.L-1)对动脉环进行处理，使之收缩到平台，添加葛根素(浴槽终浓度10-7~10-4mol.L-1)动脉环舒张至平台，记算舒张百分数。

1.2.3胸主动脉环的区域差异性：将大鼠胸主动脉近心段起剪为6段，编号1~6，取1.3.6分为近心段.中、远心段，进行实验[1]。取内皮组分为内皮组和内皮组。通过预处理，两组动脉环分别对苯肾上腺素在溶液中的浓度进行累积(10-9~10-5mol.L-1)，测定了Phe对大鼠胸主动脉条收缩的影响。最后以K-H液冲洗3次，当主动脉条张力恢复正常，平衡45min后加入，在培养20分钟后，重复上述步骤；或与L-NAME联合孵化20min后，使用浴槽终浓度10μmol.L-1和葛根素(引起最大舒张百分数的浓度)，重复性试验。

2讨论

 

在体外血管环实验中，广泛应用于心血管活性物质筛选和心血管活性物质研究中的作用机理，但是，由于不同种属动物的不同部位在血管作用上仍有差异，且操作规范各不相同，因此，同样的化合物可以得到不同的结果。而且葛根素的舒张血管作用的机理，国内外文献有很大的不同。重点探讨体外血管环试验中易被忽视的因素，即远、近心段、中间段和近段之间的活性差异。

20世纪80年代，KitaT等[2]在研究中发现家兔家族性高胆固醇血症模型中，远段胸主动脉的血管损害较其它段大得多。但在HondaH等[1]研究中，发现乙酰胆碱所致内皮性NO释放的差异与乙酰胆碱所致内皮性NO的释放有关。试验中，异丙肾上腺素所致血管收缩活性及葛根素所致的血管舒张活性较中段及近段血管环弱。乙酰胆碱对L-NAME孵育后，葛根素引起的血管舒张作用均减弱，但对远心段血管环影响最大，其发生机理可能与不同血管段合成NO能力的差异有关。葛根素和L-NAME联合孵育后，中段和近心段血管内皮细胞增殖增加，但两者间无显著性差异，提示现有文献中葛根素对血管环的作用机制存在争议。但是，对远心段和中段近心段血管环活性差异的进一步机制还有待深入研究。

不同种属的葛根素的血管环效应也可能存在差异。由于兔胸主动脉是国内外实验研究中常用的样本，因此本实验同时选取兔胸主动脉作为样本，但实验中发现兔胸主动脉体外血管环实验中存在浓度依赖关系。NAME孵化后，这一收缩效应增强。Jino等[3]研究发现，兔胸腔主动脉环L-NAME孵化后乙酰胆碱引起的血管收缩作用可能与白三烯C4和D4的合成有关。MazzettiL等[4]在大鼠胸主动脉条实验中发现，醋酸胆碱可诱发吲哚美辛孵化后用苯肾上腺素预缩血管条产生收缩作用。选择性的白三烯受体1拮抗剂可以抑制这种收缩作用，并且只有半胱氨酰白三烯1可引起血管收缩。本实验结果表明，胸主动脉环乙酰胆碱所致的收缩作用与NO的合成、释放有关，具体机制有待进一步研究，可能与白三烯类物质的合成和释放有关。

试验结果显示，葛根素的舒血管活性明显降低，并且在远心段血管环标本中，葛根素对胸主动脉的舒张作用可以被一种NO合成酶抑制剂L-NAME抑制，提示葛根素作用的发挥与内皮细胞NO系统有关。可能是，葛根素在血管内皮细胞中作用后，会促进内皮依赖的舒血管物质NO的合成和释放，而NO则介导其舒血管效应[5]。

总之，试样的选取对体外血管环实验有一定影响。其舒血管作用机制与NO系统相关，但其对NO的合成、释放等过程的影响尚需进一步研究。