白果叶软胶囊是以白果提取液和适量基质为原料制成的软胶囊，银杏提取物中含有类黄酮和银杏总内酯两种生物活性物质。其主要成分是槲皮素.异鼠李素等，它们共同作用于心、脑、外周梢血管系统，促进血液循环，改善末梢血液运转，防止因血管系统循环障碍而出现的各种症状。此外，黄酮类化合物还具有抗氧化作用，如清除游离氧[1]。采用高效液相色谱法对白果叶软胶囊中总黄酮含量进行测定。

一工具和试验药物。

1.1仪器。

LC-2010HPLC仪(日本岛津公司);KQ-300超声波清洗仪(昆山市超声波仪器有限公司);AgilentC18柱(4.6mm×250mm,5μm)。

1.2试验药物。

槲寄生素对照品(供含量测定用)，批号10081-200406。中国药物生物制品检验所)；用于含量测定的山奈素对照品，批号：110861-200303。中国药物生物制品检验所)；异鼠李素对照(用于含量测定，批号：110860-200205，中国药物生物制品检验所)；甲醇为色谱纯化，水为重蒸馏水，其它试剂为分析纯，广州美丽康有限责任公司(批号：080510.080920.091026)。

2方法和结果。

2.1色谱条件。

使用AgilentC18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱，以甲醇-水(50∶50)(磷酸调pH2.5)流速1.0ml/min，检测波长360nm[2]，柱温为30℃。槲皮素、山奈素、异鼠李素的分离效果良好，其它组分对测定无干扰，结果见图1。

2.2溶液配制。

2.2.1配制精密称量槲皮素.山奈素.异鼠李素对照品适量加甲醇制得的槲皮素浓度为1.0mg/ml.山奈素浓度0.1mg/ml时，单组分贮备液中山奈素浓度为0.1mg/ml。对以上槲皮素贮备液进行精制，分别精密量取上述槲皮素贮备液4ml.山奈素贮备液4ml,1ml，放10ml量瓶，以甲醇为准，摇匀。结果显示槲皮素浓度0.4384mg/ml.山奈素浓度0.0422mg/ml.异鼠李素浓度为0.0100mg/ml的混合对照品溶液[3-6]。

2.2.2配制供试品溶液，取本品装量差2g，精密称定，用20ml甲醇超声提取30min，滤过后，过滤后加入1.5mol/L盐酸溶液20ml，水浴回流3h，冷凉，用甲醇定容到50ml的量瓶，摇匀，以0.45μm的微孔滤膜过滤，即得[3]。

2.3线性关系考察。

精确提取槲皮素.山奈素.异鼠李素备用对照品溶液与甲醇混合溶液：1(含槲皮素0.050mg/ml.山奈素0.005mg/ml.异鼠李素0.005mg/ml)、对照组2(含槲皮素0.100mg/ml.山奈素0.010mg/ml.异鼠李素0.010mg/ml)，对照组3(含槲皮素0.150mg/ml.山奈素0.015mg/ml.异鼠李素0.015mg/ml)，对照组4(含槲皮素0.300mg/ml.山奈素0.030mg/ml.异鼠李素0.030mg/ml)，对照组5(含槲皮素0.400mg/ml.山奈素0.040mg/ml.异鼠李素0.040mg/ml)。精确吸取上述对照品溶液的每一次10μl记录峰面积，以峰面积Y为纵坐标，进样数量X(mg/g)呈线性回归横坐标，得槲皮素.山奈素.异鼠李素的回归方程：槲皮素Y=31248671X-15558(r=0.9995)；山奈素Y=30421567X+614692(r=0.9999)；异鼠李素Y=24180214X-225760(r=0.9997)。实验结果显示，槲皮素.山奈素的进样量在0.050~0.400.0.005~0.040.0.005~0.040微克之间，与峰面积呈良好的线性关系。

2.4精确密度测试。

精吸10μl混合对照品，重复进样5次，记录峰面积。结果槲皮素、山奈素、异鼠李素峰面积的RSD分别为1.8%.1.7%.1.6%。本方法的精确度较好。

2.5稳定性测试。

提取银杏叶软胶囊(批号：080510)溶液，在(0.1.2.4.8.12.24h)输入20μl记录峰面积，结果槲皮素、山奈素、异鼠李素峰面积的RSD分别为2.8%.2.5%.2.8%。在24小时内，实验液的稳定性得到了提高。

2.6重复性测试。

将同一批号的银杏叶软胶囊(批号：080510)各6份，按“2.2.2”规定的方法配制供液。各进样20μl，记录峰面积，计算含量，再次按总黄酮醇苷含量=(槲皮素含量+山甲素含量+异鼠李素含量)×2.51[2]计算，结果：槲皮素、山奈素、异鼠李素含量分别为2.33.0.19.0.06mg/粒，总黄酮类化合物平均含量为6.46mg/粒(RSD=1.5%)。本方法重现性好。

2.7加样回收试验。

精确称量同一批号的银杏叶软胶囊(批号：080510)适量，按表1精加对照品，按照配制项下的方法对其进行测定，结果见表1。

表1(n=9)回收试验结果

Tab.1Resultsofrecoverytest(n=9)

2.8试样的测定。

对3批的银杏叶软胶囊进行样品制备，按照“2.2.2”规定的方法进行配制。将“2.2.1”项和20μl的混合溶液分别精密吸取对照品10微克和20μl后，注入色谱仪测定峰面积。用外标法计算槲皮素。山奈素.异鼠李素的含量，并转换为总黄酮，结果见表2。

表格2(%,n=3)样品的测定结果

Tab.2内容管理resultsofsamples(%,n=3)

　　3讨论

萃取过程中，对甲醇-25%盐酸溶液进行水浴加热回流处理，甲醇超声提取法.盐酸加热水解三种不同的提取方法，试验结果表明，盐酸水解法效果良好，可使黄酮醇苷类成分水解完全。

为保证检测的色谱峰分离良好，出峰时间合理，试验甲醇-0.4%(50∶50)和甲醇-水(50∶50)(以磷酸调pH=2.5)、结论在流动相中，各色谱峰均选择甲醇-水(以磷酸调pH=2.5)进行分离，效果较好。