附子有回阳救逆.补火助阳.散寒止痛的功效是恢复阳气和逆转的重要药物[1]。常用于出汗、呕吐、腹泻、肢体微冷、心腹冷痛、风寒湿痹、阳痿、宫冷、阳虚外感、阴疽溃疡及所有慢性疾病。现代研究表明，除了乌头生物碱外，附子的主要化学成分是醇胺.脂类和多糖。乌头碱是附子的有效成分，也是有毒成分[2]。为保证用药安全有效，本文以附子为对象，以新乌头碱为对象.研究了次乌头碱和乌头碱的含量，比较了不同收获期三种生物碱的含量差异。然后为附子的质量评价和临床应用提供参考。

1仪器与试药

1.1仪器

Aglient高效液相色谱仪(自动进样器，四元泵，DAD检测器)，HP1100/WIND3D化工站；超声波清洗机（北京创新德超声电子研究所）；AE240电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2试药

新乌头碱（批号：110799-200404，用于含量测定）、次乌头碱（批号：110798-200404，用于含量测定）。

1.3药材

附子药材均来自贵州龙里，经贵阳中医学院药学系何祝英教授鉴定为毛苁蓉植物乌头AconitumcarmichahliDebx.的子根。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为DiamonsilC18柱(150mm×4.6mm，5μm);流动相A:乙腈-四氢呋喃(25:15)B:0.1mol/l醋酸铵溶液；洗脱程序见表1；检测波长：λ=235nm;流速：1ml/min;柱温：25℃;进样量10μl[3]。表1洗脱程序。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备

取新乌头碱.次乌头碱和乌头碱对照品适量，25ml在容量瓶中，加入异丙醇-二氯甲烷(1:1)混合溶液制成浓度为(新乌头碱00.2820mg/ml，次乌头碱0.2817mg/ml，乌头碱0.0802mg/ml)混合对照品溶液。

2.2.2供试液制备

取本产品粉末3号筛)约2g，精确称定，放置塞锥瓶，加氨试液3ml，精密加入异丙醇-乙酸乙酯(1:1)混合溶液50ml，称重，超声处理30min，冷却后称重，用异丙醇-乙酸乙酯(1:1)混合溶液补充减肥，摇匀，过滤，取续滤液，用0.45μm过滤微孔滤膜，即得[3]。

2.2.3阴性样品溶液制备

根据上述试剂溶液的制备方法，制备无附子的阴性样品溶液。

2.3系统适用性试验

分别取混合对照品溶液.10种试剂溶液及其阴性溶液μl，按“2.1”项下色谱条件进样。结果：新乌头碱阴性样品。.次乌头碱.乌头碱峰位置对应无干扰峰。样品中三种乌头碱与其他成分完全分离，分离度大于1.5。见图1。A阴性对照品；B混合对照品；C样品；1新乌头碱；2次乌头碱；3乌头碱图13种溶液高效液色谱图

2.4线性关系调查

精密吸收混合对照品22.4.8.10.16.18μl，按“2.1”项下色谱条件进样。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，新乌头碱回归方程为：Y=1225.9X+39.463，R2=0.9989;在0.56～5.08μg线性关系良好。次乌头碱回归方程为Y=1301.5X+18.581，R2=0.9996;在0.56～5.07μg线性关系良好。乌头碱回归方程为1011.4X+46.369，R2=0.9989;在0.08～1.44μg线性关系良好。

2.5精密度试验

取“2.2”项下对照品溶液10μl，按“2.1”项下色谱条件进样，重复测定6次。新乌头碱峰面积。RSD=0.51%；次乌头碱峰面积；RSD=0.76%；乌头碱峰面积RSD=1.71%。结果表明，仪器精度良好。

2.6稳定性试验

取“2.3”根据项下试剂溶液，根据项下试剂溶液，“2.1”项下色谱条件分别为0.2.4.6.8.10.12h取样，记录其峰面积。新乌头碱峰面积。RSD=1.55%，次乌头碱峰面积RSD=1.乌头碱峰面积08%RSD=2.结果表明，供试溶液为125%h内稳定。

2.7重复性试验

按“2.3”项下方法，平行制备6份试剂溶液，按照项下方法，平行制备6份试剂溶液。“2.1”项下色谱条件进样，记录峰面积，计算含量。新乌头碱含量。RSD=2.05%，次乌头碱含量RSD=1.乌头碱含量为34%RSD=2.98%。结果表明该方法重复性好。

2.8加样回收试验

取同一附子样品1.00g(精确称定)，共9份。新乌头碱按高、中、低三个量加入。.根据次乌头碱和乌头碱的对照品，“2.3”项下方法，制备试剂溶液。根据项下方法。“2.1”测定项下色谱条件，计算回收率，结果新乌头碱.次乌头碱.乌头碱的平均回收率分别为98.61%.97.52%.97.41%;RSD分别为1.71%，1.64%.1.89%。

2.9样品含量测定

精确称取不同采收时间的附子样品，按试剂溶液制备方法制备，按试剂溶液制备方法制备，按试剂溶液制备方法制备“2.1”测定项下色谱条件，计算含量。结果见表2。表2附子样品含量测定

3结果

分析测定结果表明，同一收获时间附子中次乌头碱含量最高，其次是新乌头碱，乌头碱含量最低；随着时间（7月至9月）的推移，新乌头碱含量呈下降趋势，次乌头碱.乌头碱含量呈上升趋势；三种生物碱含量之和随收获时间呈上升趋势。但是，附子的最佳收获期不能单靠含量来确定，因为附子的有效成分是其有毒成分，用得好可以挽救危机，反之亦然。为了科学合理地收集和利用附子资源，保证临床用药的安全有效，还应结合附子的毒性和临床疗效，综合分析，进行全面系统的评价“最有用也最难用”本实验可为附子的进一步研究提供科学依据。