医学论文
健康志愿者血浆中的技术
时间:2023-01-06 23:19 所属分类:医学论文 点击次数:
MiRNA有很多检测技术,包括传统的Northernblotting技术.实时定量PCR技术和RNA芯片技术也有最近发展起来的银染增强放大技术,结合物理和化学方法。.共振能量转移技术.拉曼光谱分析技术和生物传感技术。
1Northernblotting技术
该技术目前是一种非常可靠的检测技术,但需要更多的样品,检测周期相对较长,其敏感性不是很好。为此,研究人员得到了发展LNA技术。LNA它是寡核酸的衍生物。使用杂交可以显著提高杂交的敏感性和效率,约为传统杂交方法的10倍,只使用2倍h3此外,Pall等4采用可溶性碳化二亚胺代替传统的紫外交联法miRNA将其转移到尼龙膜上,使检测敏感性提高25-50倍。通过这些改进,Northernblotting技术将在很大程度上得到推广miRNA临床实验室检测技术的顺利发展。
2实时定量PCR技术
其是检测miRNA最常用的技术。可用于检测各种组织中的各种组织。miRNA表达和表达,包括血液,.肿瘤组织等病理组织。Mitchell等等使用经典Taq-Man荧光定量RT-PCR定量分析了健康志愿者血浆中的技术miR-15b.miR-16和miR-24.同时,他们还用这种方法定量测量了从前列腺癌血浆标本中筛选出来的6个miRNA,结果显示,miR-前列腺癌患者血浆中141的表达量明显增加(是健康人的46倍),同时也是对的miR-141的表达水平相同PSA通过对相关性的分析,发现两者之间存在一定程度的相关性。5除此之外,肖丙秀等研究小组还使用通用引物进行逆转录,可以一次使用RT用于检测各种产品miRNA,在很大程度上节约了宝贵的材料,提高了检测效率,对临床分析具有很高的参考价值。
3miRNA芯片技术
该技术包括微阵列芯片技术和微流体芯片技术。微阵列芯片技术是将大量寡核苷酸以高度有序的微阵列的形式排列在一定的固相支上,以检测特定的基因表达。优点是可以一次高通量分析多个基因的表达,并能识别出特殊表达的基因。微流体芯片技术是基于经典的分离理论,即不同大小的分子具有不同的流动性。小丙秀等研究小组利用该技术初步确定了一批在胃癌组织中表达较高的研究小组miRNA:R-20b.miR-20a,miR-17.miR-106a,miR-18a,miR-21,miR-106b,miR-18b,miR-421.miR-340+.miR-19a和miR-为胃癌的诊断提供了有价值的参考资料。Tan还利用该技术建立了中风患者外周血miRNA的表达谱。此外,该技术还可以用于实现miRNA表达的绝对定量,具体方法是先测量标本中所有的标本miRNA表达谱,然后选择达的表达谱,miRNA,然后根据浓度梯度在标本中添加这些miRNA水平杂交,最后测量荧光强度,然后绘制标本中的不同miRNA根据曲线确定荧光强度曲线的表达量。
为了使芯片技术更方便标准化检测和质量控制,美国食品药品监督管理局于2005年启动了芯片质量控制计划,致力于miRNA芯片检测的标准化研究对该技术进入临床领域具有重要的参考意义。最新发展miRNA在检测技术中,可采用共振能量转移技术QDs标记物不会损害生物大分子的活性,更适合活细胞miRNA的分析。这里重点介绍生物传感器技术。生物传感器在医学检验领域发挥着越来越重要的作用。生物传感器由生物识别部分和高度敏感的信号传感放大器组成。有很多优点,比如体积小.灵敏度高.成本低.检测速度快,易于自动化等。在核酸检测中,生物识别部分主要负责特异性结合待测核苷酸。近年来,纳米技术的引进有了很大的提高miRNA检测的准确性和灵敏度迅速增加。希望成为临床检测各种疾病标志物的有效方法。