由于缺血性脑血管病给病人带来了很大的伤害，炎症级联反应是导致损伤机制中的重要一环，因此减轻炎症反应对脑保护作用尤为重要。我们已经清楚地知道，细胞间粘附分子在炎症级联反应中起主要作用。所以，如果一种药物能够通过影响细胞间粘附分子的表达来减轻炎症反应，那么它在缺血性脑血管病中具有重要意义。近年来，中药制剂越来越受到人们的重视，并在临床上得到了广泛的应用，取得了良好的疗效。益脑丸是一种纯中药制剂，具有健脑益智、益气健脾、滋肾养肝、通窍醒脑的功效，但是它对缺血性脑损伤的保护作用及对脑缺血再灌注后炎症反应的抑制作用还没有报道。本文应用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，用神经功能评分和免疫组织化学染色观察益脑胶囊是否通过抑制炎症反应发挥神经保护作用。

1数据和方法。

1.1药物和试剂。

细胞间粘附分子-1(ICAM-1)免疫组织化学试剂盒采购于北京博奥森生物技术有限公司；福州闽海制药有限公司。

1.2方法。

1.2.1动物。

潍坊医学院动物中心为Wistar大鼠45只，体重180~220g，随机分组。

1.2.2分组和处理。

将动物随机分为3组：假手术组.模型组.益脑胶囊治疗组。根据缺血再灌注后的2.12.24h，药物组分为3个亚组。灌胃给药，每日1次，连续2周，模型组给予等量0.9%NaCl溶液，余相同。

1.2.3制造模型。

1.2.3.1假手术组：颈部正中切口暴露右侧颈总动脉的皮肤。

1.2.3.2模型组：根据改进的Longa-Zea氏线栓方法制作模型[1]，用10%水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉剂后，将仰卧固定在手术板上，正中切口，切开两侧颌下腺间的浅筋膜，以显示右侧胸锁乳突肌。钝分离胸锁乳突肌和胸骨舌骨肌间肌间隙，并显露颈总动脉。离断颈总动脉(CCA).颈内动脉(ICA).颈外动脉(ECA)在ECA近心端穿手术线，在近心端结扎CCA近心端和ECA近心端，并用无创动脉夹紧，将手术线穿入靠近动脉分叉的CCA，以使鱼刺入鱼线时有渗血，从距动脉分叉部位0.5mm处剪一小口，然后将其插入准备好的栓线，通过ICA(松开此处的动脉夹子)进入颅脑前动脉(ACA)阻断MCA的血流量(向内上方的角度插入)，在翼鄂动脉的情况下，可预防)。平均插入深度19~22cm[3]，用ICA结扎固定尼龙丝，预防出血及缝合皮肤。术后2小时麻醉拔栓，再灌注，分别于2.12.24h处死动物。脑苏醒后大鼠的同侧性Horner征及对侧肢体活动障碍均获得成功。1.2.4观察指标。

1.2.4.1神经功能评分：每组大鼠分别在2.12.24h再灌注后给予神经功能评分，最高18分，最低0分。

1.2.4.2免疫组织化学测定ICAM-1的表达：至预定时间，大鼠在0.9%NaCl溶液及多聚甲醛溶液下，进行心内灌流固定，断头取脑。水平行冠状切片(脑片厚度约15mm，合并A.B.C.D.E5脑片)固定、脱水、包扎、蜡块、连取5张连续切片，作免疫组织化学染色，SP法按试剂盒指示行ICAM-1免疫组织化学染色，阴性细胞呈棕黄色粒。采用PBS替代一抗，其余步骤均相同。分别在10×40倍显微镜下随机选择4个视野区域，计数ICAM-1阳性细胞。

1.3统计分析。

结果以x±s为单位，并用SPSS16.0软件进行统计分析。采用单因素方差分析，以α=0.05为显著性检验标准。

　　2结果

2.1神经功能评分。

伪术组术后神经功能缺损未见明显征象，神经功能缺损评分为0。实验组和治疗组均出现不同程度的神经功能缺损，治疗组神经功能得到改善(P.0.05)，再灌注24h最显著(P.0.01)。资料见表1。

2.2ICAM-1表达。

而在假手术组ICAM-1表达较少，而在缺血灶的大脑皮层中有明显表达(图1)。模式组的表达明显高于假手术组(P|0.01)，并呈逐渐升高趋势(图2.3.4)。而在同一时间点，处理组的表达显著低于模型组，再灌注12.24h降低更为显著(图5.6.7)。资料载于表2。

同时，同一组的假手术组比较，*P=0.01；与模型组相比，△P=0.05,--P·0.01。

　　3讨论

粘附分子在脑缺血再灌注损伤中的作用是近年来研究的热点之一。通常情况下，仅有少量的ICAM-1在血管内皮细胞中表达，脑缺血时，通过TNF-α、IL-1和INF等联合作用，ICAM-1在血管内皮细胞中的表达显著上调，中枢神经系统的粘附性参与了脑缺血再灌注损伤的恢复过程[4]。脑缺血后粘附分子的作用已经被实验性持续性和暂时性局灶性脑缺血的动物模型所证实。20世纪90年代，有很多关于缺血区如ICAM-1、ICAM-1等的动物缺血区粘附分子表达增高的报道。抗粘附分子实验研究证实ICAM-1.P-选择素等单克隆抗体能减轻脑部和脊髓的缺血损伤，具有神经保护作用，且在短时间缺血后再进行再灌注后对神经的保护作用更明显，而在永久性缺血模型中则不明显[6]。结果表明，ICAM-1表达在脑缺血再灌注2h后开始升高，在24h出现高峰。结果表明：益脑胶囊可显著降低ICAM-1表达，并可改善神经功能，可能通过抑制ICAM-1表达而起到脑保护作用。

益脑丸是由鹿茸.人参.灵芝.茯苓.龟甲胶.麦冬.五味子.石菖蒲.龙骨.远志等组成，有健脑益智，益气健脾的功效，具有滋补肝肾的功效。经动物实验证实，鹿茸对多种急慢性炎症有抑制作用，保护细胞质膜完整，改善线粒体等。进一步的研究显示，鹿茸多肽能促进神经再生，加速神经轴突生长，有助于功能恢复。党参提取液能提高机体免疫功能，清除衰老组织中产生的过量自由基，并能在一定程度上抑制脂质过氧化反应[9]。西洋参所含有效成分人参皂甙同时有保护脑细胞免受缺血再灌注损伤和抗缺氧作用[10]。近年来的实验研究表明，益脑胶囊有抗衰老、提高学习记忆等作用[11]。提示益脑胶囊能抑制ICAM-1的表达，从而抑制脑缺血再灌注后ICAM-1的表达，从而减轻缺血再灌注后的损伤，可能是益脑胶囊的脑保护机制之一。