医学论文
抑制SW480细胞的增殖能力
时间:2023-03-28 00:04 所属分类:医学论文 点击次数:
使用SPSS11.0软件进行统计分析,计数数据采用统计分析χ2检验。P<0.05是差异,具有统计意义。
1.TMPRS4蛋白在结肠直肠癌组织和正常肠上皮中表达标本免疫组化染色,TMPRS4蛋白位于细胞膜上,在肿瘤组织和转移淋巴结中呈阳性,TMPRS4蛋白在转移淋巴结中染色较强。TMPRS4表达式可能与肿瘤细胞的迁移能力有关。
2.半定量RT-PCR和Western打印检测TMPRSS4在结肠癌细胞株中的表达,通过半定量RT-PCR检测发现TMPRSS4基因在7株结肠癌细胞中有不同程度的表达,包括HT29、SW480、SW620、SW1116中的表达相对较高。Western印迹检测也有类似的结果,有些细胞在不同程度上表达TMPRS4蛋白,而HCT116、SW480和SW116的蛋白质表达量相对较高。因此,本研究决定选择SW480细胞进行下一步试验。第三,SW480细胞中TMPRSS4蛋白质表达在SW480细胞瞬时转染后降低。转染SiRNA48小时后,Western打印法发现,与空白对照组和NC组相比,SiRNA干扰组(Si组)的TMPRSS4蛋白质表达明显下降。
3.降低TMPRSS4可显著抑制SW480细胞的增殖能力。SW480细胞株处理后,采用CCK-8法测定细胞增殖能力。在第1位、2、3、4、吸光值分别在5天的不同时间点测量,可间接反映细胞增殖能力的强度。与空白对照组和NC组相比,si组细胞增殖能力在48~96小时内受到明显抑制(P<0.05)。
4.降低TMPRS4诱导SW480细胞凋亡SW480细胞株转染TMPRSS4SiRNA后孵化48小时,用Anexin收集细胞Ⅴ/PI双染色法检测细胞周期,si组细胞凋亡率为14.0%,空白对照组和NC组分别为10.4%和10.1%(P0.05)。提示TMPRS4可诱导结肠癌细胞凋亡。
5.SiRNA干扰TMPRSS4表达显著影响SW480细胞的迁移能力,采用SiRNA处理SW480细胞后,进行细胞划痕和Transwell迁移试验。结果表明,SW480细胞在划痕试验中的运动能力明显降低(P<0.05);与对照组相比,si组在transwell试验中的穿膜细胞数也明显减少(P<0.05)。
Ⅱ跨膜丝氨酸蛋白酶是一种新发现的特殊蛋白酶,具有明显的组织表达特异性,与耳聋、贫血、高血压和肿瘤的发生有关。本研究探讨了TMRPS4在结肠直肠癌组织中的表达及其对增殖、凋亡和迁移的影响。采用siRNA干扰TMPRSS4表达后,发现肿瘤细胞增殖能力减弱,细胞运动迁移能力也降低,这与Jung等之前的研究结果是一致的。其他关于蛋白质的研究表明,TMPRS4可能通过作用于细胞间粘附分子或激活其他蛋白酶在组织发育和细胞分化中发挥重要作用;通过水解蛋白酶裂解病毒表面的红细胞凝集素,促进病毒在肺部的扩散。因此,推测该基因可能通过靶向作用于细胞外基质和细胞之间的连接分子,并在调节SW480细胞的增殖和迁移方面发挥作用,具体机制仍有待后续研究揭示。同时,流体细胞凋亡检测显示,SW480细胞凋亡率在SiRNA干扰后显著增加,这与干扰后细胞增殖能力的降低是一致的,这表明通过诱导细胞凋亡来抑制TMPRS4基因的增殖。最近的研究表明,TMPRS4表达与淋巴结转移、病理分期差、肿瘤体积大、总生存率和无病生存率低有关。本研究最初表明,TMPRSS4在结肠直肠癌组织和转移淋巴结中表达不同程度,转移淋巴结的染色强度略高。因此,有必要进一步探讨TMPRS4与结肠直肠癌病理分期、分级、淋巴结转移和患者预后的相关性,为预后预测因素提供依据。继续探讨TMPRS4对结肠癌细胞增殖、凋亡和入侵的具体作用机制,揭示该基因在结肠直肠癌发生和发展中的作用。